合酶链反映查考实验室是指通过基因扩增的阵势检测特定的DNA或RNA的查考实验室。团聚酶链反映（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一种在体外特异性扩增靶DNA序列的手艺，其基本过程为模板双链DNA的变性、引物与模板DNA的退火和在DNA团聚酶结合下的链蔓延反映三个阶段的屡次轮回。每一次轮回后的扩增产物均可行为下一轮轮回的模板，表面上，扩增产物量呈指数相貌高潮，即经过n个轮回后开云kaiyun，产物量加多到2n倍，短时候内在体外可获取数百万个特异靶DNA序列的复制，为估量、防患、会诊、救助监测、预后不雅察和健康情状评价提供了一种极有匡助的实验室接济技巧。

PCR查考实验室是PCR试剂分娩企业在家具查考过程中不可枯竭的职责环境，其环境适度水和煦质料科罚水平径直影响着最终家具查考成果的准确性。由于该家具自己的稀疏性，《医疗器械分娩质料科罚表率附录体外会诊试剂》、《医疗器械分娩质料科罚表率体外会诊试剂现场查验率领原则》条件中，对PCR试剂的分娩和查考环境作念出明确章程。此外现行卫生行业的法令、法度以及相关文献中对于PCR查考实验室均作出章程，主要波及《寰宇临床查考操作规程》（第4版）、《医疗机构临床基因扩增查考实验室科罚主意》（卫办医政发〔2010〕194号）以及《及时荧光团聚酶链反映临床实验室 运用指南》（WS/T 230-2024）等行业法度的相关要求。

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本查验指南旨在匡助北京市医疗器械监管东谈主员增强对PCR查考相关过程的融会和把抓，率领全市医疗器械监管东谈主员对PCR查考实验室假想成立与质料适度的监督查验职责。同期，为PCR试剂分娩企业在PCR查考实验室的假想建造和科罚要求提供参考。

本指南中波及或援用的国度相关法律、法令、规定、法度、查验指南等发生内高兴效用变化时，要以那时实际的最新版为准。必要时，北京市药品监督科罚局应从头研究改动，以确保本指南不息顺应要求。

一、适用鸿沟

本查验指南可行为北京市药品监督科罚局组织、实施的体外会诊试剂家具注册质料科罚体系现场核查、医疗器械分娩许可现场核查、医疗器械分娩监督查验等波及PCR查考实验室查验的参考贵府。

基因测序查考实验室等波及PCR试剂的相关部分应当参照本查验指南实际。

二、查验重点

（一）PCR查考实验室布局

分娩企业应当提供PCR查考实验室假想有盘算和/或平面假想图（应当表明风向或压差梯度）。

1.PCR查考实验室与PCR试剂分娩区域应当在各自孤独的建筑物或空间内，保证空气不径直连通，防护扩增时形成的气溶胶形成交叉混浊。

2.原则上PCR查考实验室应当诞生以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。左证使用仪器的功能，区域可稳当统一。若使用及时荧光定量PCR仪且不需要进行后续产物分析职责，扩增区、扩增产物分析区可统一。若使用样本处理、核酸索求及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可统一。统一的区域需聘请相应生物安全防护和幸免环境混浊的方法。

3.各区域在物理空间上应当彻底相互孤独，各区域不管是在空间上照旧在使用中，应当弥远处于彻底的分隔情状。不应当仅仅相貌上的分区，不应当是一个区域嵌套一个区域。

4.各区域不应当有空气的径直连通。扩增区与扩增产物分析区各区域宜接收孤独直排阵势出风。接收空调机组阵势的，PCR查考实验室应当具备孤独空调机组；同期应当磋议停机后各房间空气连通的可能性，聘请必要的适度方法。

5.按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区标的空气压力应当以递减的阵势进行，使得PCR查考实验室的空气流向应当按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区标的进行，防护扩增产物顺空气气流参预扩增前的区域。空气流向应当为单向，辞谢卑鄙混浊上游。应当诞生合理的压差梯度，并安装压差监测安装，以有用解说空气流向，压差梯度不宜低于5帕。PCR查考实验室成立可参考附件进行假想。

6.诞生缓冲间的，缓冲间内通向实验室和走廊的门应当安装互锁安装或聘请相应方法，幸免出现两个门同期怒放的情况。

7.各区间若诞生传递窗，应当为双侧开门，要求密封严密，况兼两侧的门应当为互锁安装或聘请相应方法确保双方门不会同期开启。

（二）仪器设施成立

1.试剂储存和准备区的功能：储存试剂的制备、试剂的分装和扩增反映羼杂液的准备，以及离心管、吸头等虚耗品的储存和准备。配套用品一般应当包括：

（1）顺应储存温度要求的雪柜；

（2）混匀器；

（3）离心计；

（4）水浴箱或加热模块；

（5）微量加样器；

（6）紫外消毒开发；

（7）虚耗品：一次性手套、一次性口罩、一次性帽子、耐高压处理和（或）一次性的离心管和加样器吸头；

（8）专用职责服和职责鞋（套）。

2.标本制备区的功能：核酸（RNA、DNA）索求、储存及加样。配套用品一般应当包括：

（1）顺应储存温度要求的雪柜；

（2）离心计；

（3）混匀器；

（4）水浴箱或加热模块；

（5）微量加样器；

（6）紫外消毒开发；

（7）生物安全柜；

（8）核酸索求开发；

（9）虚耗品：一次性手套、一次性口罩、一次性帽子、耐高压处理和（或）一次性的离心管和加样器吸头（带滤芯）；

（10）专用职责服和职责鞋（套）；

（11）如需处理大分子DNA，应当具有超声波开发。

3.扩增区的功能：cDNA合成、DNA扩增及检测。配套用品一般应当包括：

（1）核酸扩增开发；

（2）微量加样器；

（3）离心计；

（4）紫外消毒开发；

（5）虚耗品：一次性手套、一次性口罩、一次性帽子、耐高压处理和（或）一次性的离心管和加样器吸头（带滤芯）；

（6）专用职责服和职责鞋（套）。

4.扩增产物分析区的功能：扩增片断的进一步分析测定。视查考方法不同而定，基本成立如下：

（1）分析开发；

（2）微量加样器；

（3）紫外消毒开发；

（4）顺应储存温度要求的雪柜；

（5）虚耗品：一次性手套、一次性口罩、一次性帽子、加样器吸头（带滤芯）；

（6）专用职责服和职责鞋（套）。

上述各区域仪器开发为一般成立，实验室应当左证使用的扩增检测手艺或试剂的本性，对仪器开发进行必要的增减。

5.开发的爱护爱护

应当建立开发爱护爱护规程，计量开发应当按期检定或校准。举例核酸扩增开发、微量加样器等应当每年进行检定或校准职责。

（三）职责历程及发达事项

1.单次实验参预各职责区域应当严格按照单一标的进行，即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区。

2.各职责区域必须有明确的标志，不同职责区域内的开发、物品不得混用。

3.不同职责区域的职责服应当加以分辨，不得混用（举例不错接收不同神采）。

4.实验室的清洁应当按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的标的进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁器用并防护交叉混浊。实验垃圾属于医疗废料的应当按照《医疗废料科罚条例》相关章程进行处理。

5.职责竣事后，应当立即对职责区进行清洁及消毒。

6.储存试剂和用于标本制备的虚耗品等材料应当径直运送至试剂储存和准备区，不可经过扩增区及扩增产物分析区。应当对加样吸头、PCR反映管等虚耗品进行防护，防护被混浊。使用的试剂和耗材不应当对家具查考形成滋扰。

7.加入待测核酸时，应聘请相应的方法幸免样本间的交叉混浊。对具有潜在传染危急性的材料，应当在生物安全柜内开盖，并有明确的样本处理和灭活要领。

8.如需对扩增产物进行开盖处理的，应当聘请相应的方法幸免气溶胶所致的混浊。

9.扩增产物分析区如存在溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或辐射性核素等有毒无益物资，应当发达实验东谈主员的安全防护，必要时配备透风橱等防护开发。

（四）东谈主员培训情况

参与PCR查考的职责主谈主员应当具备相应的专科常识和技能，包括能纯属操作相关开发，明确悉数职责的历程，掌抓出现混浊情况的处理方法以及实验室质料适度方法和检测成果的解释。

查验东谈主员不错通过商讨或要求东谈主员实质操作对其进行评价，也不错通过查阅东谈主员培训纪录，对其进行评价。

（五）文献科罚情况

磋议实质建立对PCR查考实验室的质料科罚体系文献，制定相关程小引件、操作规程等，并保留相应纪录。相关质料科罚体系文献包括但不限于实验室科罚轨制、东谈主员科罚轨制、样本科罚轨制、实验室防护科罚轨制、甩掉物科罚轨制等，以及相关设施开发开动与爱护操作规程、查考规程等。

在查验过程中应当额外发达现场检察、商讨、纪录的实质情况与分娩企业的文献章程、纪录的顺应性。

附件1：

理念念的PCR查考实验室假想

图A 缓冲间为负压的理念念PCR查考实验室诞生模式

图B 缓冲间为正压的理念念PCR查考实验室诞生模式

图A和图B所给出的PCR查考实验室诞生图是较为理念念的诞生模式，提议企业参照此种模式假想并建立实验室。

附件2

参考贵府

1.《对于发布医疗器械分娩质料科罚表率的公告》（国度食物药品监督科罚总局公告2014年第64号）

2.《对于发布医疗器械分娩质料科罚表率附录体外会诊试剂的公告》（国度食物药品监督科罚总局公告2015年第103号）

3.《对于印发医疗器械分娩质料科罚表率现场查验率领原则等4个率领原则的奉告》（食药监械监〔2015〕218号）

4.寰宇临床查考操作规程（第4版）

5.《医疗机构临床基因扩增查考实验室科罚主意》（卫办医政发〔2010〕194号）

6.《及时荧光团聚酶链反映 临 床 实 验 室运用指南》（WS/T 230-2024）

7.《生物安全实验室建筑手艺表率》（GB 50346-2011）

8.《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2008）

发布于：江苏省